有機抗菌材料抗菌檢測瓊脂擴散法技術原理及方法介紹

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有機抗菌材料抗菌檢測瓊脂擴散法技術原理及方法介紹

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2024-09-26
來源：中科檢測

瓊脂擴散法屬于定性測定方法，是利用抗菌材料在瓊脂內向四周自由擴散，使其濃度隨擴散距離增大而降低，在一定的擴散距離內，細菌生長受到抑制而形成抑菌圈，根據抑菌圈大小定性地判定細菌對藥物的敏感性。主要包括K-B法、杯碟法和孔穴擴散法以及挖溝法。

作為第三方檢測中心，中科檢測機構擁有CMA和CNAS認證檢測資質，檢測設備齊全，數據科學可靠，可出具國家認可的有機抗菌材料抗菌檢測報告。

抗菌檢測：K-B法

K-B法即紙片瓊脂擴散法，將含有抗菌材料的圓紙片放在均勻地接種了試驗菌株的瓊脂平板上，抗菌樣品吸取瓊脂中的水分不斷向紙片周圍區域擴散形成遞減的梯度濃度。紙片周圍抑菌濃度范圍內菌株的生長被抑制，形成透明的抑菌圈，抑菌圈的大小與抗菌材料的抗菌效力有直接關系。濾紙片分濕、干2種，可以在試驗時用6mm的無菌紙片沾取藥物溶液制成濕紙片，也可以預先做成一定濃度的干燥紙片。一般來說預先制成的干燥紙片較為實用且更加準確。

結果評價：量取各紙片抑菌直徑大小，并仔細觀察抑菌圈的清晰度，通常直徑小于10mm的判為該抗菌藥物為低度敏感，10～15mm之間為中度敏感，15～25mm為高度敏感，25mm以上為極度敏感。具體對于不同的菌株以及不同的有機抗菌材料紙片，應需參照NCCLs標準或者CLSI標準。

K-B法能直接體現出抗菌材料的抗菌效力，其優點是：此法簡便、經濟，直觀明顯，對比鮮明，有一定的試驗依據，有利于批量樣品的處理。缺點是：以K-B法測定抗菌活性時，若有機抗菌樣品具有較大的分子結構或者與瓊脂有較大相互作用力，那么抗菌樣品在瓊脂內的擴散將非常緩慢。對于某些快速或蔓延生長的微生物作為抗菌活性測定時，常在抑菌圈內生成較薄的菌苔使抑菌圈現象不明顯（即“衛星現象”）或不顯示抑菌環，從而對樣品的抗菌活性判斷錯誤，同時測試結果還受到多種因素的影響，如培養基的pH、瓊脂的含量、接菌量、孵育溫度和時間。

抗菌檢測：杯碟法

用滅菌棉拭子將待測懸菌液致密均勻地涂布于平皿培養基表面，然后將滅菌牛津杯放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙。每個平板可放置4～6個牛津杯。分別向各個杯中滴加有機抗菌樣品，勿使其外溢。置37℃培養箱內孵育8～18h，觀察抑菌圈大小。杯碟法操作需非常小心，否則易造成牛津杯在瓊脂平板表面滑動，抗菌材料向菌層中滲透，擴散不均勻，得到的抑菌圈不規則。其優點是，成本低廉，重復性和準確性好，而且由于杯碟法加藥量相對比較多，特別適合中藥的體外抗菌試驗。需要注意的是在杯碟法中，試驗菌株的濃度對抗菌效力的影響很大。