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2024-06-24 - 來源：中科檢測
傳染病和細菌性感染對全球公共衛生構成了重大威脅，它們已經位列全球主要致死原因的前茅。面對這一挑戰，開發創新且高效的抗菌策略顯得尤為緊迫。為了驗證抗菌劑的殺菌能力，需要進行一系列體外抗菌實驗。
一、孔徑抑菌法
孔徑抑菌法是一種簡便而廣泛的體外抗菌測試方法。其基本理念是將待測試的抗菌物質溶解于培養基中，然后在瓊脂平板上創建不同直徑的孔洞，并將溶液滴入這些孔洞。通過觀察孔洞周圍細菌的生長情況，可以判斷待測物質是否具有抑菌效果。如果存在抑菌作用，孔洞周圍將形成無菌區域。
操作步驟包括：
1.準備瓊脂平板和待測物質的溶液。
2.在平板上制作不同直徑的孔洞。
3.將溶液滴入孔洞。
4.培養一段時間后，觀察孔洞周圍的生長情況。
二、最小抑菌濃度法（MIC）
最小抑菌濃度法是一種定量評估抗菌物質抑制細菌生長能力的實驗方法。通過在一系列不同濃度的溶液中接種細菌，可以確定最低有效濃度，從而評估抗菌活性。
操作步驟包括：
1.準備一系列濃度遞增的待測物質溶液。
2.在試管中加入待測物質溶液和細菌懸液。
3.培養一段時間后，觀察細菌的生長情況。
4.根據最低有效濃度來評估抗菌物質的抗菌活性。
三、平板計數法
抗菌劑對細菌進行殺菌處理以后，將細菌稀釋到合適的倍數進行平板涂布并對長出的菌落進行計數。通過計算細菌存活率或者致死率來表征抗菌劑抗菌效果。
四、活死染色法
活死染色法是一種常用的評估抗菌效果的方法。處理后的細菌通過特定的染色劑進行染色，以區分活細胞和死細胞。
目前有許多品牌的細菌活死染色試劑盒，以SYTO-9和PI為例:
SYTO-9：一種熒光核酸染料，可用于染色RNA和DNA，包括真核細胞和革蘭氏陽性/陰性細菌。
PI：一種細胞核染色劑，對DNA染色并在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光，主要標記凋亡晚期和死細胞。
五、清除生物膜法
隨著對生物膜在慢性和頑固性疾病中作用的認識加深，評價抗菌劑對生物膜的抑制效果變得至關重要。生物膜中的細菌對傳統殺菌劑和宿主免疫具有高度抗性。
評估方法包括：
1.結晶紫染色：觀察生物膜的剩余面積或測定其吸光度（OD值）。
2.熒光共聚焦成像：直觀顯示抗菌劑對生物膜的影響。
這些方法為抗菌劑的研究和開發提供了重要的實驗基礎，有助于發現和驗證新型抗菌策略。
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